O que é cromatografia líquida?

A cromatografia líquida
Existem diferentes tipos de cromatografia, como a cromatografia em papel, a cromatografia em coluna, a cromatografia gasosa, a cromatografia planar, a cromatografia de afinidade, a cromatografia em camada fina e a cromatografia líquida.

Cromatografia líquida é uma técnica usada em laboratórios para separar moléculas dissolvidas ou íons na fase líquida. O processo começou em meados do século 19, quando era usado para separar principalmente a clorofila nos pigmentos das plantas. Desde então, esse processo foi desenvolvido por Mikhail Semyonovich Tsvet, um botânico russo que usava colunas de carbonato de cálcio no início do século XX.

Existem diferentes tipos de cromatografia, como a cromatografia em papel, a cromatografia em coluna, a cromatografia gasosa, a cromatografia planar, a cromatografia de afinidade, a cromatografia em camada fina e a cromatografia líquida. Este artigo se aprofundará nos detalhes sobre o último, que é comumente referido hoje como Cromatografia Líquida de Alta Pressão.

Cromatografia líquida de fase reversa

Existem dois subtipos desse processo, conhecidos como Cromatografia Líquida de Fase Normal (NPLC), em que a fase estacionária é mais polar do que a fase móvel. O outro subtipo é a Cromatografia Líquida de Fase Reversa (RPLC), onde a fase móvel é mais polar. Este tipo também é a técnica de separação mais comumente usada hoje em dia.

O processo de Cromatografia Líquida leva o sujeito líquido forçado em uma coluna que é preenchida com partículas de formato esférico ou irregular ou camada monolítica porosa usando altíssima pressão. Ele usa instrumentação complexa para bombear a amostra de líquido por meio de uma bomba para fornecer tempo de análise mais rápido e resolução mais alta. Ao fazer o processo, é essencial determinar qual modo de separação usar. Em geral, as amostras insolúveis em água ou não polares usam a fase normal, enquanto as amostras solúveis usam a fase reversa. Normalmente, os especialistas de laboratório consideram certos fatores ao escolher os solventes a serem usados. A força do solvente é baseada em escalas de sílica ou alumina e o índice de polaridade do solvente. Os solventes de fase reversa mais comuns são metanol, acetonitrila, tetra-hidrofurano e água. Esses solventes têm baixa viscosidade, transparência aos raios ultravioleta e são miscíveis entre si.

O outro subtipo é a Cromatografia Líquida de Fase Reversa (RPLC)
O outro subtipo é a Cromatografia Líquida de Fase Reversa (RPLC), onde a fase móvel é mais polar.

Depois de considerar que tipo usar - cromatografia normal ou reversa - a próxima etapa é carregar a mistura no topo da coluna seguida por mais solvente. Os diferentes componentes na mistura de amostra passam por esta coluna em taxas diferentes devido às diferenças em seu comportamento de partição entre a fase líquida móvel e a fase estacionária.

A temperatura afeta a cromatografia líquida

Como as variações na temperatura afetam a cromatografia líquida em uma escala mínima, ao contrário de outros métodos de cromatografia, as eluições de gradiente têm sido usadas para reduzir o tempo de análise e melhorar a resolução geral da mistura. No entanto, nem todos os métodos de cromatografia líquida podem fazer uso de eluições de gradiente, pois as separações de líquido para líquido tendem a ter resultados instáveis, enquanto as exclusões de tamanho não mostram nenhum bom resultado. Os métodos de troca iônica, juntamente com os métodos de adsorção e fase ligada, usam eluições de gradiente muito bem.

A cromatografia líquida é mais comumente usada no trabalho de laboratório preparatório para purificar e isolar alguns componentes de uma mistura. Onde existem pequenas colunas descartáveis, a cromatografia líquida também é usada em separações de ultratraços.

Hoje, a cromatografia líquida é mais comumente usada como uma forma de testar amostras de água para contaminantes prejudiciais e poluição da água. Os cientistas ainda estão encontrando maneiras de melhorar esse campo, embora o conhecimento humano atual dessa tecnologia seja suficiente para desempenhar seu papel na aplicação na vida real.

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